進(jìn)口熒光顯微鏡是以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。其主要用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光，進(jìn)口熒光顯微鏡就是對(duì)這類物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
進(jìn)口熒光顯微鏡的基本原理：
熒光：是一種非溫度輻射冷光，據(jù)發(fā)生性質(zhì)可分為光化熒光(由特定光源光譜激發(fā)而產(chǎn)生的熒光)、放射熒光(放射性物質(zhì)激發(fā))、生物熒光(生物體發(fā)出)、化學(xué)熒光(如磷氧化時(shí))等。
熒光現(xiàn)象：某物質(zhì)在受到某種特定波長的高能量光(短波長)照射后獲取能量，幾乎即時(shí)(約在10～15s后)其分子內(nèi)的電子躍遷到較高能級(jí)軌道使分子進(jìn)入激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)的分子不通過內(nèi)部轉(zhuǎn)換方式消耗能量回到基態(tài)，而是釋放出相應(yīng)較低能量的光量子→人眼可見的熒光(較長波長)。
熒光現(xiàn)象有兩種：一次熒光現(xiàn)象，又稱“固有熒光”或“自發(fā)熒光”，是指經(jīng)照射后，就能發(fā)出熒光的物質(zhì)，此類物質(zhì)的化學(xué)特征是發(fā)光分子具有共軛雙鍵，π電子活動(dòng)性大。二次熒光現(xiàn)象，又稱“繼發(fā)熒光”，物質(zhì)經(jīng)照射后不能或只能部分發(fā)生微弱的熒光，這樣就需先用熒光色素(或稱熒光染料、熒光探針)標(biāo)記處理，將熒光色素標(biāo)記結(jié)合插入到不發(fā)光的活性分子中去，再經(jīng)照射才能發(fā)生熒光。熒光色素應(yīng)具備的基本條件是能與不發(fā)光分子的某個(gè)區(qū)域有特異性的牢固結(jié)合，同時(shí)不會(huì)影響被結(jié)合分子的結(jié)構(gòu)和特性，光量子效率應(yīng)≥013。
熒光的產(chǎn)生包含了激發(fā)(Excitation)和發(fā)射(Emission)兩個(gè)過程，激發(fā)光譜短于發(fā)射光譜，故光色不同。而不同的熒光物質(zhì)或熒光色素有其最敏感而有效的激發(fā)波長，因此選擇合適的激發(fā)/發(fā)射光譜以獲得最佳的熒光鏡像質(zhì)量是實(shí)驗(yàn)中要首先考慮的。
熒光顯微鏡是利用“光化熒光”成像，如果所選激發(fā)波長在肉眼所看不見的近紫外光區(qū)(320～400nm)，熒光的發(fā)射光譜也較普通光鏡光源的平均波長短，光學(xué)分辨率提高。
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更新時(shí)間：2021-11-25 
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